NGS引物

继qPCR技术成为分子诊断的主流技术平台后，第二代测序（NGS）技术的迅速发展给予了科学研究和医学诊断领域更高的技术平台及更广阔的发挥空间。作为NGS应用的重要原料组成，NGS引物和常规PCR引物相比，对于纯度、定量精确度、碱基序列准确性及交叉污染率提出了更高的要求。生工生物拥有二十多年引物合成经验，我们针对NGS应用优化产品性能和质量，并提供全面的质量检测。我们同样拥有先进的NGS技术平台，能对NGS引物的交叉污染率进行检测。

NGS实验流程包含样品制备（核酸抽提/核酸制备）、文库构建、上机测序和生物信息学分析几个步骤。NGS相关引物主要体现在文库构建的步骤中。其中，全基因组测序仅需要进行片段化和加接头的文库构建步骤，而全外显子组测序和目标区域捕获测序除了文库构建的步骤还需要目标区域捕获的步骤。

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我们的优势

1.  优选合成原料，优化生产流程，确保极低的碱基错误率；
2.   NGS接头引物交叉污染率≤0.05%
3.  关键质量指标动态批次间差异控制；
4.  建立周期性质量跟踪体系并定期出具质量跟踪报告。

订购信息

  文库构建

接头的本质是一段短的碱基序列，基本包括三个部分：与flow-cell上面寡核苷酸相同或互补的片段P5/P7；测序时测序引物结合部分R1/R2；用于区分不同样本的Index。接头是待测DNA片段与Flow-cell连接的桥梁，目的片段连接接头后可以在flow cell上扩增再测序。生工生物可以按您的要求定制各种不同类型的接头引物，并可提供独立单链、双链混合和双链退火三种不同形式分装的接头引物。

  目标区域捕获

杂交捕获探针根据DNA碱基互补原理，设计与目标捕获区互补的DNA捕获探针（带biotin修饰）。在实验过程中，先将待捕获的基因组DNA构建标准NGS文库，进一步使用捕获探针与NGS文库杂交，然后使用链霉素磁珠富集杂交后的DNA文库，洗脱探针后进一步PCR文库即可NGS测序。生工生物可提供常规合成引物池探针（≤10,000条）和芯片合成引物池探针（≥2,000条）。

备注：

*由于芯片合成每条Oligo均在独立的微反应器中合成，所以本身就是一种物理分隔，加上合成的准确度很高，QC也会对纯度进行检测，故无需额外纯化。

通过多重PCR的方法来进行目标区域捕获适合大规模的样本和小片段/少位点的富集。和杂交探针捕获的方法比，常规情况下，多重PCR的费用也更加经济。

NGS Blocker引物通常用于捕获建库过程中阻止文库接头的杂交，提高捕获测序的特异性。生工生物提供定制Blocker引物，并可出具包含纯度、分子量等信息的检测报告。

质量控制

  质谱检测（MS）：确保极低的碱基错误率

分子量质谱检测实例

测试引物理论分子量为8052.67。通过质谱检测，实测分子量为8052.5，分子量误差经计算为-0.002%，

小于质控标准±0.05%。测试引物质谱检测合格，碱基序列的正确性在质量可控制范围之内。

  交叉污染率（CCR）：NGS接头引物使用 HPLC_CE(IVD) 作为纯化方式，交叉污染率<0.05%，使用HPLC作为纯化方式，交叉污染率<0.1%

2019年Q1~2020年Q2季度NGS接头引物交叉污染率抽样检测

检测高通量接头/引物合成制备过程中的交叉污染，将index引物建好文库，进行高通量测序，

计算不同组合的序列频数。根据频数计算每一条index引物的交叉污染概率

资源

文档下载
常规引物合成订购表（68 KB）	引物定制合成手册（1.84 MB）
工业产品手册（7.17 MB）	引物使用说明书（1 MB）
修饰基团说明手册（4 MB）
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